락토트랜스페린이라고도 알려진 락토페린(Lactoferrin)은 트랜스페린 계열의 다기능 단백질 입니다. 우유, 초유에 포함되어 있으며 우유에서 정제하거나 재 조합으로 생산할 수 있는 첨가물 중 하낭비니다.
이 락토페린은 신체 면역체계의 중요한 구성요소중 하나인데 향균, 항 바이러스, 항 기생충, 항암 및 항 알러지 기능과 같은 특성을 가지고 있습니다.
세균의 번식에는 철분이 필요한데 락토페린은 세균이 철분을 공급받기 이전 유리된 철분을 격리하여 세균의 번식을 차단하는 역할을 가지고 있습니다. 또한 세균 세포벽에 있는 지질 다당류와 결합하고 유리된 철 부분은 과산화물을 형성하여 세균을 산화시키는 효과를 가지고 있습니다.
따라서 한국에서는 생리활성기능 2등급으로 인정이 되어 건강기능식품에 널리 이용되고 있습니다.
여기서는 Polymer base gel을 가진 Shodex C4P-50 4D 컬럼을 이용하여 일본 식품첨가물 공전을 준거하여 락토페린을 분석하였으며, 보다 나은조건으로도 분석을 진행하였습니다.
1. 일본 식품첨가물 공전에 준거한 락토페린 분석
<시료 전처리>
- 시판용 락토페린 농축액 0.1g를 취함
- 농축액에 0.3% NaCl 용액 50mL를 가하여 분석 샘플로 사용
<크로마토그램>
Sample : 25 µL
1. Lactoferrin (Standard solution) 4000 mg/L
Column : Shodex Asahipak C4P-50 4D (4.6 mm I.D. x 150 mm)
Eluent :(A); 0.3 % NaCl/CH3CN/TFA=9000/1000/3
(B); 0.3 % NaCl/CH3CN/TFA=5000/5000/3
Linear gradient: 50 to 100 % B (0 to 25 min)
Flow rate : 0.8 mL/min
Detector : UV (280 nm)
Column temp. : 40 °C
2. 개선된 조건으로 락토페린 분석
<시료 전처리>
- 시판용 락토페린 보충제 3알을 사발에 곱게 분쇄
- 분말 2g을 취하여 여기에 DIW 50mL를 가함
- 10분간 초음파 처리
- 원심분리하여 No.5B 필터로 여과
- 처음 10mL는 버리고 나머지를 취함
- 0.45μm 멤브레인 필터로 여과하여 분석샘플로 사용
<크로마토그램>
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Sample : 25 µL
1. Lactoferrin (Standard solution) 1000 mg/L
Column : Shodex Asahipak C4P-50 4D (4.6 mm I.D. x 150 mm)
Eluent : (A); H2O/TFA=100/0.05(v/v)
(B); CH3CN/TFA=100/0.05(v/v)
Linear gradient: 0 to 50 % B (0 to 10min), 50 % B (10 to 15 min),
50 to 0 % B (15 to 16 min), 0% B (16 to 20 min)
Flow rate : 0.8 mL/min
Detector : UV (280 nm)
Column temp. : 40 °C
분석 결과 Shodex C4P-50 4D컬럼은 보충제에서 락토페린을 효과적으로 분석할 수 있는 것으로 입증이 되었으며 20~4,000mg/L 농도 범위에서 양호한 선형성을 얻을 수 있었습니다.
<Asahipak C4P-50 4D Column Spec Sheet>
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